細胞系的建立

細胞系的建立是指從動物或人體組織中分離出細胞，經(jīng)過體外培養(yǎng)，使其無限增殖，形成穩(wěn)定的細胞群體。這個過程通常分為以下幾個步驟：

組織分離： 從動物或人體組織中分離出所需的細胞。

初代培養(yǎng)： 將分離得到的細胞接種于培養(yǎng)瓶中，在適宜的培養(yǎng)條件下進行培養(yǎng)。

傳代培養(yǎng)： 當(dāng)細胞生長到一定密度時，進行傳代培養(yǎng)，以維持細胞的生長狀態(tài)。

克隆化： 從傳代培養(yǎng)的細胞中分離出單細胞，進行克隆培養(yǎng)，獲得純系的細胞。

細胞系的建立： 克隆化的細胞經(jīng)過多次傳代，形成穩(wěn)定的細胞系。

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細胞系的鑒定

細胞系的鑒定是為了確定細胞的種類、純度和遺傳穩(wěn)定性，確保實驗結(jié)果的可靠性。常用的鑒定方法有：

形態(tài)學(xué)鑒定

直接觀察法： 利用倒置顯微鏡觀察細胞的形態(tài)、大小、生長方式等。

染色法： 通過染色觀察細胞核、細胞質(zhì)等結(jié)構(gòu)。

免疫學(xué)鑒定

免疫熒光染色： 用熒光標記的特異性抗體檢測細胞表面或內(nèi)部的標志物。

流式細胞術(shù)： 通過熒光標記的抗體對細胞進行分型和計數(shù)。

Western blot： 檢測細胞內(nèi)特異性蛋白的表達。

遺傳學(xué)鑒定

核型分析： 分析細胞的染色體數(shù)目和結(jié)構(gòu)。

STR分型： 檢測細胞的短串聯(lián)重復(fù)序列，用于細胞身份鑒定。

SNP分析： 檢測細胞的單核苷酸多態(tài)性，用于細胞系溯源。

功能鑒定

酶活性測定： 檢測細胞內(nèi)特異性酶的活性。

激素分泌測定： 檢測細胞分泌激素的能力。

藥物敏感性測定： 檢測細胞對藥物的反應(yīng)。

細胞系鑒定的重要性

確保實驗結(jié)果的可靠性： 不同細胞系的生物學(xué)特性存在差異，使用錯誤的細胞系會導(dǎo)致實驗結(jié)果的偏差。

避免交叉污染： 細胞系的交叉污染會影響實驗結(jié)果，甚至導(dǎo)致實驗失敗。

滿足監(jiān)管要求： 在科研和藥物研發(fā)中，細胞系的鑒定是必不可少的。

影響細胞系穩(wěn)定性的因素

傳代次數(shù)： 傳代次數(shù)過多可能導(dǎo)致細胞發(fā)生遺傳變異。

培養(yǎng)條件： 培養(yǎng)條件的變化可能影響細胞的生長和特性。

污染： 細菌、真菌、支原體等污染會影響細胞的生長和功能。

細胞轉(zhuǎn)化： 細胞可能發(fā)生惡性轉(zhuǎn)化，導(dǎo)致細胞特性發(fā)生改變。

細胞系庫

為了方便科研人員使用，世界各地建立了許多細胞系庫，如ATCC（美國典型培養(yǎng)物保藏中心）、ECACC（歐洲細胞培養(yǎng)物保藏中心）等。這些細胞庫收集和保存了大量的細胞系，并提供相關(guān)信息和服務(wù)。