分光光度計(jì)，也稱為光譜儀（spectrometer），是一種科學(xué)分光檢測(cè)儀器，其主要功能是將成分復(fù)雜的光分解為光譜線。它采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過系列分光裝置，產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源。當(dāng)這些光源透過測(cè)試的樣品后，部分光源會(huì)被吸收。通過計(jì)算樣品的吸光值，可以進(jìn)一步轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。
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一、分光光度計(jì)原理
分光光度計(jì)基于分光光度法，根據(jù)物質(zhì)對(duì)不同波長(zhǎng)的單色光的吸收程度不同進(jìn)行定性和定量分析的方法。光源發(fā)生的復(fù)合光經(jīng)單色器（即光柵或分光棱鏡）單色化后得到單色光，分別通過盛樣品溶液及參比溶液的吸收池，再投射到接收器，通過待測(cè)溶液，被部分吸收，未被吸收的光到達(dá)光檢測(cè)器，使光信號(hào)轉(zhuǎn)變成電信號(hào)并加以放大記錄下來(lái)，測(cè)定出溶液的吸光度，由吸光度與波長(zhǎng)繪制的吸收曲線可對(duì)該物質(zhì)進(jìn)行定性分析，由吸光度與物質(zhì)濃度畫出的工作曲線可進(jìn)行定量分析。
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朗伯-比爾(Lambert-Beer)定律
當(dāng)入射光波長(zhǎng)一定時(shí)，待測(cè)溶液的吸光度A與其濃度和液層厚度成正比，即k為比例系數(shù)，與溶液性質(zhì)、溫度和入射波長(zhǎng)有關(guān)。
A=kbc=log(I0/Iν)
A:吸光度 k:吸光系數(shù)
b:液層厚度 c:溶質(zhì)濃度
分光光度法分析的基礎(chǔ)
二、分光光度計(jì)的組成
分光光度計(jì):主要由光源系統(tǒng)、單色器系統(tǒng)、樣品室、檢測(cè)系統(tǒng)組成。
光源：發(fā)出所需波長(zhǎng)范圍內(nèi)的連續(xù)光譜，有足夠的光強(qiáng)度，穩(wěn)定
可見光區(qū)：鎢燈，碘鎢燈(320~2500 nm)
紫外區(qū)：氫燈，氘燈(180~375 nm)
氙燈：紫外、可見光區(qū)均可用作光源。
單色器:將光源發(fā)出的連續(xù)光譜分解為單色光的裝置。
棱鏡:依據(jù)不同波長(zhǎng)光通過棱鏡時(shí)折射率不同。
光柵:在鍍鋁的玻璃表面刻有數(shù)量很大的等寬度等間距條痕(600、1200、2400條/mm)。利用光通過光柵時(shí)發(fā)生衍射和干涉現(xiàn)象而分光。
吸收池:用于盛待測(cè)及參比溶液。
可見光區(qū):光學(xué)玻璃池;紫外區(qū):石英池。
檢測(cè)器:利用光電效應(yīng)，將光能轉(zhuǎn)換成電流訊號(hào)。光電池，光電管，光電倍增管。
指示器:刻度顯示或數(shù)字顯示、自動(dòng)掃描記錄。
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三、分光光度計(jì)種類
可見分光光度計(jì)：用來(lái)測(cè)量待測(cè)物質(zhì)對(duì)可見光（400～760nm）的吸光度，并對(duì)其進(jìn)行定性和定量分析。廣泛應(yīng)用于醫(yī)藥衛(wèi)生、臨床檢測(cè)、環(huán)保監(jiān)測(cè)、食品生產(chǎn)等領(lǐng)域。
紫外-可見分光光度計(jì)：測(cè)量樣品對(duì)可見光或紫外光（200～760nm）的吸光度。該產(chǎn)品的光路可分為單光束、假雙光束和雙光束，是目前使用最多、覆蓋面最廣的分析儀器之一，在生命科學(xué)、材料科學(xué)、環(huán)境科學(xué)、農(nóng)業(yè)科學(xué)、化學(xué)化工等多個(gè)領(lǐng)域中被廣泛應(yīng)用。
紅外分光光度計(jì)：用于研究大于760nm的紅外光譜，主要分析各種狀態(tài)（氣、液、固）的樣品，具有快速、樣品量少、特征性強(qiáng)、不破壞樣品等特點(diǎn)。
熒光分光光度計(jì)：用于掃描液相熒光標(biāo)記物所發(fā)出的熒光光譜，廣泛應(yīng)用于科研、化工、醫(yī)藥、生化、環(huán)保以及臨床檢驗(yàn)、食品檢驗(yàn)、教學(xué)實(shí)驗(yàn)等領(lǐng)域。
原子吸收分光光度計(jì)：適用于樣品中微量及痕量的組分分析，是材料分析及質(zhì)量控制部門進(jìn)行常量、微量金屬（半金屬）元素分析的有力工具。
四、主要用途
分光光度計(jì)的功能包括物質(zhì)檢測(cè)、標(biāo)準(zhǔn)物質(zhì)圖譜對(duì)照、純度檢驗(yàn)、反應(yīng)動(dòng)力學(xué)研究等，應(yīng)用覆蓋面如下：
化學(xué)分析：通過測(cè)量樣品吸收光線的特性，確定樣品中的化學(xué)成分和濃度。
生物科學(xué)：測(cè)量生物分子如蛋白質(zhì)、核酸和酶的濃度，以及測(cè)量細(xì)胞培養(yǎng)物中的細(xì)胞密度和生物分子間的相互作用。
藥學(xué)和醫(yī)學(xué)研究：分析藥物的質(zhì)量控制，確認(rèn)藥物的純度和含量，以及測(cè)量血液中藥物的濃度和檢測(cè)體液中的生化指標(biāo)和生物標(biāo)志物。
環(huán)境監(jiān)測(cè)：快速分析和測(cè)量環(huán)境樣品，如水體中的溶解氧、重金屬、有機(jī)污染物和大氣中的污染物含量。
食品科學(xué)：分析食品中的營(yíng)養(yǎng)物質(zhì)、添加劑和殘留物的濃度，以及檢測(cè)食品中的有害物質(zhì)和微生物。
材料科學(xué)：測(cè)量材料的透明度和光學(xué)性能，了解材料的結(jié)構(gòu)和化學(xué)組成，以及測(cè)量材料的熒光和磷光等特性。
五、使用方法
分光光度計(jì)的使用包括預(yù)熱儀器、選定波長(zhǎng)、固定靈敏度檔、調(diào)節(jié)“0”點(diǎn)、調(diào)節(jié)T=100%和測(cè)定等步驟。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，需要切斷電源，清洗并保養(yǎng)儀器。
六、注意事項(xiàng)
比色皿注意清潔，不能用毛刷清洗
不能用手接觸比色皿光學(xué)表面
避免設(shè)備受潮
用完及時(shí)關(guān)閉光源延長(zhǎng)光電管壽命
